آنالیز مولکولی ژن فون ویلیبرانت در بیماران فون ویلیبرانت تیپ یک با استفاده از تکنیک ژل الکتروفورز حساس به ساختار (csge): مقایسه دو روش دستی و ماشینی (فلورسانت)

سابقه و هدف: بیماری فون ویلیبرانت تیپ یک، شایع ترین بیماری ارثی خونریزی دهنده ناشی از نقص در عملکرد ژن فون ویلیبرانت با طول 178000 نوکلئوتید می باشد. روش های مختلفی برای تعیین جهش در مطالعات ژنتیکی وجود دارد. در این مطالعه ابتدا روش دستگاهی ژل الکتروفورز حساس به ساختار (csge) با کمک رنگ های فلورسانت برای ژن فون ویلیبرانت طراحی و سپس قابلیت دو روش مختلف دستی و فلوئورسانت در تعیین جهش در این دو با هم مقایسه گردید.مواد و روش ها: 52 اگزون و ناحیه های اتصال اگزون - اینترون و همچنین ناحیه 3' ژن فون ویلیبرانت در افراد شاخص از7 خانواده مبتلا به فون ویلیبرانت تیپ یک و یک مورد کنترل نرمال با استفاده از 56 pcr مختلف تکثیر گردید. قطعات pcr حاصل به منظور یافتن جهش با استفاده از هر دو روش دستی و فلوئورسانت بررسی شده و قطعات حاوی باند اطافه تعیین توالی شدند.یافته ها: 125 مورد pcr با باندهای اضافه با استفاده از روش الکتروفورز فلورسانت (f-csge) در کل مشاهده شد در حالیکه 101 مورد توسط روش الکتروفورز دستی (m-csge) مشاهده گردید. 5 جهش نقطه ای توسط هر دو روش شناسایی گردید شامل 3 جهش جدید، گلابسین 19 به آرژنین (r19g) در اگزون 2؛ آرژنین 1315 به هیستیدین (r1315h ) در اگزون 28 و سیتوزین 2304 به لیزین (c2304y) در اگزون 40 و دو جهش شناخته شده پرولین 1266 به لیزین (p1266l ) و سرین 1285 به پرولین (s1285p) در اگزون 28 می باشد. علاوه بر این، 45 پلی مورفیسم مختلف توسط روش f-csge و 39 پلی مورفیسم به وسیله روش m-csge در مجموع شناسایی گردید. 192 قطعه pcr در هر بار آزمایش توسط f-csge و حداکثر 40 نمونه در روش دستی بررسی و آنالیز گردید.استنتاج: ی اگر چه f-csge روش وقت گیرتر و گرانتری نسبت به m-csge است اما روشی سریع، با حساسیت بیشتر و با ظرفیت بالاتری نسبت به m-csge برای تعیین جهش های ناشناخته در ژن vwf است.